红松籽免疫活性肽的生产关键技术优化

【摘要】红松籽免疫活性肽的生产关键技术研究内容隶属于国家高技术研究发展计划(863计划)课题（2013AA102206），主要承担的研究任务为坚果活性蛋白稳定性与加工适用性研究与开发，围绕课题研究任务进行了4个部分的研究工作，经研究获得的结论如下：(1)在红松籽粕可控酶解中试工艺研究中，是以红松籽粕为酶解原料，将红松籽酶解原料液进行高速分散均质处理，利用碱性蛋白酶对蛋白底物进行酶解，进行了单因素试验与响应面优化试验，单因素试验分别考察了温度(45℃、50℃、55℃、60℃、65℃)、pH值(6.00、7.00、8.00、9.00、10.00、11.00)、酶与底物浓度比(2%、4%、6%、8%、10%、12%)对水解率的影响，在单因素试验基础上，进行响应面优化试验，构建出自然空间还原力变化的回归方程为：Y=32.48+5.38X1+2.13X2+2.17X3，获得红松籽粕可控酶解的最优工艺参数：pH为9.85，温度为49.61℃，酶与底物浓度比为10.89%，水解度预测值为39.97%。对红松籽粕酶解产物进行超滤分离后，获得了4种红松籽多肽，各组分分子量范围分别大于30、10-3、3-1、小于1kDa。(2)在红松籽免疫活性肽组分活性评价与筛选中，利用动物试验的方法，对获得的4种红松籽多肽进行免疫活性评价，并分别从固有免疫系统与适应性免疫系统出发，评价红松籽多肽的免疫活性，开展的试验包括小鼠NK细胞活性测定、碳廓清试验、腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球试验、小鼠细胞因子水平测定(IL-2,IL-4,IL-6,IFN-γ)、迟发型变态反应、血清溶血素测定，各试验结果表明，经口给予ICR小鼠100mg/(kg·d)的10-3kDa红松籽多肽4周，上述试验结果均为阳性(P<0.05)。根据《保健食品功能学评价程序和检验方法》的规定，判定100mg/(kg·d)10-3kDa红松籽多肽具有增强免疫力作用。(3)在红松籽免疫活性肽致突变性评价中，分别进行了小鼠精子畸变率测定和骨髓微核发生率测定，试验结果表明，经口给予ICR小鼠4种红松籽免疫活性肽4周后，小鼠精子畸形率和骨髓微核发生率均在正常范围内，结果验证了红松籽免疫活性肽冻干粉无致突变性作用。(4)在红松籽免疫活性肽微胶囊造粒工艺研究中，以分离筛选获得的免疫活性肽为原料，以海藻酸钠为单一壁材进行包埋，以包埋率为主要试验指标，借助于单因素与响应面实验设计方法，构建出红松籽免疫活性肽微胶囊包埋工艺回归方程为：Y=11.36+5.26X1+41.08X2+20.00X3—0.35X1X2+0.10X1X3-0.72X2X3—1.75X12—10.60X22—2.41X32，其中X1为氯化钙浓度（%），X2为海藻酸钠浓度（%）X3为肽液浓度（%）；优化出红松籽免疫活性肽微胶囊包埋工艺最优参数:氯化钙浓度1.48%、海藻酸钠浓度1.71%、肽液浓度3.68mg/mL，包埋率达到90.20%。
【作者】刘博龙；
【导师】林松毅；
【作者基本信息】吉林大学，食品工程，2014，硕士
【关键词】红松籽；可控酶解；免疫活性肽；微胶囊；

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